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單細胞高通量液滴測序Drop-seq對樣本組織細胞的分析
行業(yè)新聞 2022-06-21

  單細胞高通量液滴測序Drop-seq技術是一種可快速分析數千個單細胞的方法。通過此測序方法是能夠將每個細胞包裹在納升級的微滴中,進行RNA雜交并產生MRNA轉錄,可進一步分析MRNA轉錄的起源細胞。


  單細胞懸液測序儀


  單細胞高通量液滴測序過程

  

  1、準備材料  

  把細胞從樣品組織中分離出來,制備細胞懸浮液,制備微珠懸浮液帶分子條形碼。

  

  2、微滴制備  

  把細胞懸浮液和微珠懸浮液泵入芯片,然后與油匯合形成單獨分散的微滴,用每個微珠將每個細胞包裹在同一個微滴中。

  

  3、RNA雜交 

  細胞組織在微滴中裂解,釋放mRNA,細胞在微珠上與分子條碼雜交。

  

  4、逆轉錄  

  為了形成mRNA逆轉錄物(STAMPS),裂解微滴,釋放mRNA雜交物,開始逆轉錄。

  

  5、PCR擴增  

  在核酸外切酶的作用下,切斷每個MRNA逆轉錄物,并通過PCR擴展核酸,以擴大基因信息。

  

  6、測序分析  

  采用各種生物信息學工具來對細胞生物進行測序分析。

  

  液滴微流控是可快速分離微體積中的樣本,可實現數千上萬個細胞的平行高通量分析,通常每秒可產生1000個微滴,每個微滴體積為1nl;此外,在液滴微流控實驗過程中是不需要使用流熒光細胞儀等高端儀器的,其實驗操作簡單、快速、便捷。

  

  上述便是采用單細胞高通量液滴測序Drop-seq對樣本組織細胞的分離過程,將其細胞在微滴中升級,進而進行雜交轉錄,進而可分析出轉錄物的起源細胞樣本組織。


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