在對生物細胞的測序實驗中,如何獲得高質(zhì)量的單細胞懸浮液是成功的關鍵,但復雜多樣的組織類型卻會給懸浮液的制備帶來挑戰(zhàn)。那這該如何從細胞組織樣本中獲得高質(zhì)量的單細胞懸液呢?
單細胞懸液制備儀測序技術可以在生物細胞層面進行高分辨率的實驗分析,進而可揭示單細胞的狀態(tài)和功能,避免了由傳統(tǒng)基因組技術平均信號產(chǎn)生的結果誤差;被廣泛應用于腫瘤、發(fā)育、免疫、神經(jīng)科學、干細胞分化、大規(guī)模細胞圖譜構建等行業(yè)研究領域。
為了確保后續(xù)的單細胞實驗能夠順利進行,因此需要嚴格的質(zhì)量去控制細胞懸液的制備;為了確保細胞樣品的活性,建議使用新鮮的細胞組織去制備細胞懸液。若是不能在取樣后直接進行測試,可將組織樣本保存在4℃環(huán)境下的組織保存液中,在48小時內(nèi)對其進行懸液消化。
在解離前可將組織剪切成碎塊,可增加酶與組織的接觸面積;在切割組織時,可以加入少量百分之10的細胞培養(yǎng)基,可避免組織細胞脫水。酶消化法主要是利用酶來去除細胞間質(zhì),可使細胞脫落分散;由于不同組織的細胞間質(zhì)不同,所以需要選擇特定的酶和特定的消化時間。
在獲得單細胞懸浮液后,可根據(jù)質(zhì)量控制標準對細胞的活性、結團率、濃度、直徑分布等參數(shù)進行質(zhì)量檢驗;如果這些參數(shù)的檢驗結果沒有達到預期,那對懸浮液的質(zhì)量應根據(jù)具體情況進行優(yōu)化。
若細胞活性較低,可通過去除死細胞來提高懸浮液的細胞活性;對于細胞的結團率高是因為組織沒有完全消化或細胞釋放DNA,因此需要根據(jù)不同情況去調(diào)整消化條件、DNA優(yōu)化酶處理等措施。
綜上便是對有關生物細胞制備高質(zhì)量的單細胞懸浮液的操作應用簡述,具體情況還需要根據(jù)實際實驗狀況進行分析。